高通量組織研磨儀如何提高樣品DNA的研磨提取質(zhì)量
2020-11-23 05:27:02
研磨機(jī)的研磨提取，是很多研磨者的選擇之一。但不同的研磨器械所應(yīng)用的性能也有所不同，但那令人心之向往的還是研磨者的高通量組織研磨儀。
實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)用于控制提取的核酸/cDNA和基因組DNA的質(zhì)量。為評(píng)估所提取的核糖核酸的質(zhì)量，可建立一種特異性的單拷貝基因系統(tǒng)，用以量化基因組當(dāng)量和細(xì)胞數(shù)。而該系統(tǒng)用于對(duì)DNA質(zhì)量控制的概要，使用該系統(tǒng)針對(duì)單拷貝基因，使用ct值來(lái)確定某些組織的dna提取質(zhì)量。超過(guò)一定閾值的樣本表明dna已經(jīng)被降解，需要重新獲取，而利用系統(tǒng)可對(duì)偽基因進(jìn)行靶向復(fù)制。
在準(zhǔn)備研磨提取前，我們需要取新鮮的動(dòng)物組織做樣品，剪切成50-100mg左右的濕重，用液氮快速冷凍，在-80℃的低溫冰箱中保存。這些被冷凍的組織在DNA提取前，需被放在深孔板中，然后把深孔板放在干冰上進(jìn)行冷凍。每個(gè)孔中需加入研磨鋼珠和緩沖液，使其凈化溶解。用高通量的研磨儀器將其深孔蓋密封，開始研磨提取。
在50℃下樣品進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，需加入60微升水，加熱5分鐘至95℃，在冰上進(jìn)行冷卻，使反應(yīng)終止。而樣品提取的dna質(zhì)量是由ct值決定的，是受內(nèi)源受控的。待超過(guò)某一閾值時(shí)，樣品質(zhì)量會(huì)受到影響，RNA總降解，需要再次提取備用樣品。通常用該系統(tǒng)來(lái)評(píng)DNA的質(zhì)量，其目標(biāo)是具有特定物種的甘油醛-3-磷酸脫氫酶或核糖體基因。
應(yīng)用高通量組織研磨儀對(duì)動(dòng)物組織的研磨提取，不僅能快速、高通量地完成樣品制備，且樣品提出的核酸質(zhì)量好，提取量高。這樣的高通量研磨儀，你還有什么理由不應(yīng)用呢。
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